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真核重组质粒pCDNA3.1-Flag-PTEN 和原核重组质粒pGEX-6P-1-GST-PTEN构建

摘要:目的:构建人第10号染色体缺失的磷酸酶(PTEN)真核重组质粒pCDNA3.1-Flag-PTEN和原核重组质粒pGEX-6P-1-GST-PTEN,研究PTEN融合质粒生物学效应。方法:根据基因库中PTEN序列,设计并合成相关引物。用基因重组技术将目的片段插入pCDNA3.1-Flag和pGEX-6P-1-GST空载质粒中,通过PCR和DNA测序,鉴定插入基因序列。将pCDNA3.1-Flag-PTEN转染到HEK 293细胞,将pGEX-6P-1-GST-PTEN转到E.coli BL-21中,通过Western blotting和考马斯亮蓝染色法分别检测PTEN蛋白的表达。结果:PCR显示目的基因插入成功;DNA测序显示插入序列与目的基因序列完全一致,无位点突变;Western blotting和考马斯亮蓝染色法证实融合质粒可以在生物体内正确表达。结论:成功构建PTEN相关真核和原核融合质粒并正确表达,为PTEN在帕金森疾病中的机制研究奠定了基础。

关键词:
  • 抑癌蛋白  
  • 人第10号染色体缺失的磷酸酶  
  • 真核  
  • 原核  
  • 克隆构建  
  • 重组表达  
作者:
柴云; 于明; 朱颖
单位:
江苏大学附属医院神经内科; 江苏镇江212001
刊名:
蚌埠医学院学报

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期刊名称:蚌埠医学院学报

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