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南海芋螺ITS-PCR体系的建立与优化

摘要:为了建立适合南海芋螺的ITS-PCR体系以研究不同种类芋螺的遗传多样性,以多种芋螺的3种不同组织为材料,利用海洋生物基因组试剂盒法提取芋螺基因组DNA为模板,采用正交试验对ITS-PCR过程中的关键影响因素进行优化,以最优ITS-PCR体系扩增获得不同种类芋螺的ITS序列并进行测序鉴定。结果表明:最佳ITS-PCR反应体系(25μL)为Taq酶0.3 U,dNTPs 3 mmol/L,Mg^2+1.0 mmol/L,引物2.0μmol/L,模板40 ng,10×PCR Buffer(不含Mg 2+)2.5μL,ddH2O补足25μL。采用该最佳体系对芋螺基因组DNA进行PCR扩增,产物经单向测序获得芋螺ITS部分序列,经NCBI数据库比对其匹配度为83%。

关键词:
  • 芋螺  
  • 体系优化  
  • 正交设计  
作者:
陈琴; 彭超; 赵峰; 李军; 高炳淼
单位:
海南广播电视大学; 海南海口570208; 深圳华大海洋科技有限公司; 广东深圳518083; 海南医学院药学院; 海南海口571199
刊名:
贵州农业科学

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期刊名称:贵州农业科学

贵州农业科学杂志紧跟学术前沿,紧贴读者,国内刊号为:52-1054/S。坚持指导性与实用性相结合的原则,创办于1972年,杂志在全国同类期刊中发行数量名列前茅。