摘要:从假单胞菌593中克隆出多铜氧化酶 copA 基因,并将其转入大肠杆菌BL21(DE3) pLysS 过量表达和纯化.纯化的CopA蛋白展示出漆酶活性,针对漆酶的3种底物ABTS、DMP、SGZ,CopA的最适反应pH分别是3.5、7.5和 7.5,最适反应温度分别是50 ℃、50 ℃和42 ℃.pH稳定性和热稳定研究发现,在pH 7.0条件下,CopA比较稳定,在温度大于42 ℃保存该蛋白,其活性降低较快.二价金属离子影响实验发现,CopA漆酶活性能被二价铜离子显著加强.酶动力学常数实验结果展示,CopA作用于底物ABTS, Km为0.281 mmol/L,V max 为3.02×10^-3 mmol·L^-1·min^-1 ,k cat 为1.8 s^-1;CopA作用于底物DMP, K m为0.141 mmol/L,V max 为4.54×10^-3 mmol·L^-1·min^-1,k cat 为2.2s^-1;CopA作用于底物SGZ,K m为0.025 mmol/L,V max 等于0.7×10 ^-3 mmol·L^-1·min^-1,k cat 为0.87 s^-1 .
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