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过表达TPL2蛋白BHK21细胞系的建立及其初步应用

摘要:利用慢病毒表达系统将TPL2(COT和MAP3K8)质粒稳定整合在乳仓鼠肾细胞(baby Hamster Syrian kidney)BHK21细胞基因组染色体上,建立稳定表达TPL2的BHK21/TPL2细胞系。构建TPL2质粒,通过基因合成将TPL2基因和慢病毒载体Lv-PCDH连接,得到重组慢病毒载体Lv-TPL2。通过嘌呤霉素筛选得到的阳性细胞株BHK21/TPL2即为稳定表达TPL2蛋白的BHK21细胞株。运用间接免疫荧光、激光扫描共聚焦显微技术、实时荧光定量PCR和普通PCR等技术分别验证TPL2基因组整合、转录、反应活性以及FMDV、SVV在BHK21/TPL2细胞株上的增殖效果。结果,TPL2基因被稳定整合在BHK21细胞基因组染色体上,建立的细胞系连续传代不丢失。接种病毒后致细胞病变严重,相对于正常的BHK21/PCDH细胞,整合有TPL2的BHK21细胞对FMDV、SVV的易感性显著增强。上述结果为FMDV疫苗的研制和生产提供了更佳的功能细胞系。

关键词:
  • tpl2基因  
  • 口蹄疫病毒  
  • svv病毒  
  • 慢病毒表达系统  
作者:
郝军红; 闫鸣昊; 张大俊; 张学刚; 申超超; 徐国伟; 李国丽; 张克山; 郑海学; 刘湘涛
单位:
中国农业科学院兰州兽医研究所; 家畜疫病病原生物学国家重点实验室; 农业部畜禽病毒学重点开放实验室; 国家口蹄疫参考实验室; 甘肃兰州730046
刊名:
中国兽医科学

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期刊名称:中国兽医科学

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