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人CDK14基因表达荧光定量PCR检测方法的建立及初步应用

摘要:目的 建立一种人细胞周期蛋白依赖性激酶14(CDK14)基因表达荧光定量PCR检测方法。方法 利用Trizol法提取不同人肺癌细胞株中总RNA,以β-Actin和CDK14分别为内参和目的基因,分别设计特异性扩增引物,建立人CDK14基因表达荧光定量PCR检测系统并评估其检测性能。同时将其应用于不同细胞系siRNA干扰前后的CDK14基因相对表达水平检测。结果 经电泳分析、熔解曲线、产物测序确认人CDK14基因表达荧光定量PCR检测系统已建立,其特异性良好,重复性佳(CV=7.13%),线性范围较宽(CDK14与β-Actin分别在Ct值范围22.47~32.96与15.14~27.55间具有良好的相关性,r^2=0.9844。)。利用该体系检测发现:在HCC827 D5和H1650细胞中CDK14基因高表达; 在1~3号干扰片段中,1号片段为有效片段。结论 人CDK14基因表达荧光定量PCR检测方法已成功建立。

关键词:
  • 细胞周期蛋白依赖性激酶14  
  • 基因  
  • 实时荧光定量pcr  
作者:
罗凯; 黎谢梦丹; 石兴源; 贾晓婷; 王倩; 邓敏; 仇秦威; 张志杰; 贺智敏
单位:
广州医科大学附属肿瘤医院/广州医科大学肿瘤研究所; 广州510095
刊名:
陕西医学检验

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期刊名称:陕西医学检验

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