我知道错了。对于没有给你准备过年礼物的事情，我真的知道错了，我对不起您，我给你下跪，我给你道歉，在这里写检讨，请听我分析一番自己为什么错了。
首先，我错误地以为过年只有收长辈压岁钱，没有送情侣礼物的习俗。通过您的悉心教育，我终于明白了过年除了收长辈压岁钱，还应该给你买礼物。
其次，我有钱不知道为你花钱，这就是错。不用解释不用掩饰不用吞吞吐吐不用辩论，我过年收了压岁钱没有花到你身上，肯定是我的错啊。
所以，我一定要将它好好保存起来。
检讨；老公，我错了。虽然是老公让我难过，但是我不该发脾气，还转着圈的生气。老婆以后不会了，一定冷静下来跟老公好好说。老公，我错了
，老公我爱你！老公，以后你说学生装好看，我就说，老公给买，还要买情侣的。老公说我没看你，我就马上亲亲老公，老公难受了，我急马上使劲亲
亲老公！老公早上打电话我就起来，老公问问题我就回答，肯定不训老公！老公我爱你！
傻瓜，老公先写了检讨，怎么宝贝又给写了。
所以新年伊始，让我们先从一份新年计划开始，为婚姻保驾护航。
2017年悄然而至，很多人估计和小编一样，开始规划新一年要完成的目标，如工作目标、减肥目标等。不知道各位辣妈的新年计划中是否有这一项―需要和爱人共同完成的目标和计划。如果没有，不妨学学来自德国的施莱德夫妇，一起做个新年计划。这样做不仅能维护夫妻关系，更能给亲密关系注入新的生命。
1.放下手机
你有没有统计过，有多久没有和伴侣一起做点儿事了？而这种结果，有多大程度是由手机造成的？施莱德夫人发现，手机比孩子还要黏人，霸道地占据着两个人的时间，他们已经很久没有一起做些事儿了。所以为了增进感情，施莱德夫妇决定将放下手机作为新年计划的第一项。他们约定，每天都要抽出一点儿时间，用语言表达爱，用身体传递爱。至于手机，它的新年计划就是学会独处。
2.一起谈谈钱
在金钱使用上的分歧是离婚的主要原因之一，施莱德夫妇每年都要做的一件事，就是谈谈钱。哪些支出是不合理的，哪些投资可以继续等。他们会定期一起付账单，而不是交由夫妻中的一人处理所有财务。这种方式，会让夫妻间的财务更加透明，并且做到合理支配金钱，让工作和生活更有动力更高效。
3.获取文化滋养
当夫妻相处了很长时间，便容易失去新鲜感，即便是娱乐活动都变得单调乏味。于是，施莱德夫妇约定，每年都要来一次文化滋养，到他们从来没有去过的带有文化气息的地方，比如室外雕塑画廊、文化创意园或名人故居等。这样做不仅会提高彼此的文化素养，更重要的是为夫妻关系带来新的思考，为夫妻间的对话引入新的话题。
4.一起读书
阅读能够激发有意义的对话，促进健康的情感联结。所以，施莱德夫妇计划一起去图书馆读书，或者简单地轮流读同一本书，之后再一起讨论书中喜欢的情节，或者最有感触的观点。这种思想的碰撞和交流，能让夫妻间有更多精神层面的沟通。当你把思想的触角伸向对方，而对方心领神会地握住它的那一刻，感动和满足会溢满全身。
5.一起大笑
两个人一起大笑，这种事似乎不难做到，但是生活中能让人发笑的事越来越少了，感知快乐的能力也越来越弱。施莱德夫妇为了能彼此分享快乐的瞬间，他计划一起去看几场搞笑话剧，并下载了一些喜剧电影。那些一起欢笑的时刻自然而然会改善心情、释放压力。没准儿大笑几次后，伴侣在你眼中越来越吸引人，这就是大笑释放的魔法。
6.学习两性关系课程
人们倾向于花费大量的时间、精力和金钱投入到孩子、个人成长，但是在两性关系方面却做得并不好。他们认为花钱和精力去学习两性关系没有必要，但这就是为什么他们反复陷入同样错误的模式，让关系越来越僵。施莱德夫妇就计划一起报班学习亲密关系的课程，他们认为通过学习，能够加强和伴侣之间的沟通，学会表达爱，这对夫妻关系是非常有益的。
7.打一架
没错，听上去好像有点儿暴力，但是这并不意味着可以不管不顾地动手，相反，打一架的意思是将不满的情绪完全发泄出来，而对方要做一个情绪的垃圾桶全盘接收，再把这些负面的情绪马上处理掉，避免负面情绪持续积压导致最后喷发出来。所以，来吧，打一架，然后一起迎接一个平静的新开始。
8.讨论严肃的事情
价值观统一，是维护亲密关系的必要条件之一。所以，施莱德夫妇计划每天都要抽出10分钟左右的时间，谈论他们的关系，谈论朋友、压力、生活的梦想等，或者更简单一点儿，谈谈童年快乐的记忆，最喜欢的歌曲等。你可以把谈话的时间放在晚餐时或者睡觉前，时间不用多，就能使你们的价值观趋于一致。
9.一起运动
谁都知道，独自到健身房运动是一件很枯燥的事情。施莱德先生说，他到健身房锻炼，得有人监督才能坚持下来。为了能让丈夫坚持健身，施莱德夫人计划两个人一起锻炼，督促丈夫的同时，还能增加运动的乐趣和动力。夫妻共享一个爱好，为了共同的健身目标奋斗，这能给夫妻关系提供很大的正能量。
和伴侣相处了一段时间，女人常常告诫自己要像“蒙娜丽莎”一般永远保持微笑。要温柔，不要出风头，要充分考虑另一半的意见。这样就真的幸福吗?
自我检查：在与伴侣相处的过程中，你是否有“蒙娜丽莎”特性：
1 对冲突感到恐惧，不愿意与对方争吵。
2 基本上把伴侣的想法、愿望和期待看作是自己的想法、愿望、期待和目标，自身的目标反而弄不清楚了。
3 行为处世的最高目标是：将众人的愿望协调起来。
4 伴侣还没有提出请求和帮助，就已经抢在前面维护他的利益。
5 当伴侣影响了自己的情绪，也尽量原谅、容忍、宽恕。觉得自己要做个“蒙娜丽莎”般微笑的大女人。
解除女人的“蒙娜丽莎”误区
理解误区：
认为自己对别人心灵上的困难必须予以理解。
理解是一种掩饰
“这我很理解”、“对此我完全可以理解”，这一类的话女人想都不用想就会脱口而出。一大堆人聊天的场合，丈夫会笑着说“我老婆什么都不懂的。”被嘲讽的人不但不会立场鲜明地还以颜色，反而会坐在那里微笑。
自查一下：
你之所以能容忍某个人的行为方式，是不是因为缺乏公开表示反对的勇气?
我们提醒你：
在很多情况下，理解本身并不是一种礼貌的表现，而是一种掩饰，是以软弱无力的方式表示同意。女人从小受到的教育就是要温柔和听话，而不是大声地直抒己见“我不喜欢!”在与伴侣相处中，长期扮演着知书达理的角色最后可能造成的是持续的心理压抑，潜意识的恐惧感或低他一等的感觉。
实例分析：
Michelle和丈夫Leo都是律师。夫妻俩共同开办了律师事务所。Leo觉得妻子不具备一定的气质，缺乏足够的说服力，因此所有接案、上法庭等对外的事情都自己来负责，只让妻子做一些处理文案、安排日程等幕后工作。其实，Michelle专业方面比Leo更强，口头表达能力也更优秀。长期为了丈夫埋没自己的才华，Michelle觉得这是对男人的理解。但她自己也时常迷茫，觉得自己被所谓的理解给吞噬掉了。
你需要做什么?
1 允许自己偶尔的情绪大爆发。
2 如果他伤害到你，请他为自己的行为道歉。
3 不要为他辩解，避免说“他也不想这样”，“他不是成心的”、“他是刀子嘴，豆腐心”这样的话。
帮助误区：
想通过提供帮助来博得别人的欢心和注意。像妻子而不是像母亲一样帮助他
有些女人的伴侣热衷于体育活动或狂热地投身于周游世界。为了帮助伴侣实现他们的人生目标，她们宁愿放弃自己的人生目标。她们像母亲一样对伴侣的生活起居关怀得无微不至，反而让另一半有种想逊的感觉。
自查一下：
你是否总在家里扮演庇护者的角色，并且从来没想过适可而止地结束自己的“义举”?
我们提醒你：
你精心照料自己的丈夫，帮助他全身心地投入到业余爱好中去。你为丈夫感到自豪，从丈夫的执著中感受到快乐。但真的是这样吗?每每坐在丈夫身边，你总面带微笑，为他忙吃忙喝，为他备上干净的衬衣。但作为个体的你，除了这个外就没有其他价值了吗?你的那些个人兴趣呢?
实例分析：
电器设计高级工程师李先生每个月收入很高，但对生活起居方面却是一窍不通。他太太王小姐为了帮助丈夫全身心投入到工作中，每天晚上老公工作到很晚回家，王小姐总会把熬好的汤递到他手边，周末李先生加班，王小姐总会按照李先生的喜好去购买相关物品。她习惯了这种站在背后帮助先生的生活，自己却做不到说服丈夫在一年中抽出时间陪自己玩一次，而没有丈夫的陪同，她自己又不愿意出去。她已经全身心地投入到了自我放弃之中，因此与伴侣都产生不了冲突。
你需要做什么?
1 记住你不是他的母亲而是他的伴侣。不用事事帮助他，应该让他处理自己的事情，甚至帮助你。
2 别为了自己的面子纵容伴侣的恶习。迈出勇敢的步伐，勇敢采取行动。
3 不要说类似“只要他幸福了，我也就幸福了”，“只要他需要，我就愿意帮忙”这样的话。
奉献误区：
扮演牺牲者角色，而且也的确按照牺牲者的严格含义来奉献自己。牺牲自己。你干吗不自私点有些女性觉得子女的过失、生活伴侣的性冷淡或者失业等，自己都有责任。而且她们觉得长期的自我牺牲总可以得到补偿，她们一个劲儿地为他人忙碌，而被帮助者却会觉得一切理所应当。自身的痛苦成就了别人的幸福和快乐的保障。活着的目的就是只要你过得比我好。
自查一下：
你是否觉得只要全家过得好就行，伴侣和孩子的幸福是最重要的，让别人说不了我们的闲话是最重要的。你希望用自己的辛苦换来全家的幸福。我们提醒你：
你是否容忍陪同丈夫一遍又一遍地去看同一部你根本不感兴趣的电影，容忍丈夫把家庭收入的三分之一用在自己的业余爱好上。丈夫在外面一掷千金，自己对此却一无所知。为什么在事情还没发生之前就已经表现得心甘情愿，不提出任何愿望和要求?牺牲自己，舍弃自己，难道这就是至高无上的善?
实例分析：
Lisa的老公执意要开个计算机商店，学财务的Lisa分析过其实现在这个行情根本赚不了钱，但她老公却说讨厌朝九晚五的生活，开个这样的商店是自己一直的梦想。Lisa觉得这么多年老公事业一直不太顺，在原来的公司和上司合不来，和同事关系也不太好。如果有什么不顺心的事情，他立刻会激动起来，用挖苦和中伤的语言伤害别人，她老公觉得开计算机商店是自己人生的转机，如果这个时候再打击他就太不应该了。Lisa把父母遗留下来的财产全部砸进了这个商店，她总是会有不安，但却告诉自己：“可是有什么办法呢，他毕竟是我的丈夫啊!”
你需要做什么?
1 别让他觉得你的牺牲天经地义。
2 定期去做美容、去健身，宠宠自己。
以上部分内容摘自《好女孩上天堂》
开始时，女性需要男人的带领，现在，他开始迷惑了，为什么她没有了当初一碰就燃的爆发力，什么原因让她的兴奋成了奢侈的事儿？别急着检讨自己，其实，作为亲密爱人的她这个时候应该负主要责任。因为，成熟的情爱运动也需要女性摆脱被动来施展和引导，而且要做得含而不露。为了共同的快乐，你要学着在爱中与他聊聊。
男人是死要面子的，要让亲爱的他对你坦承自己的爱的感觉，还真是一件不容易的事。安很爱自己的老公，她喜欢用一些身体语言来帮助老公找到自己的兴奋点，所以，每次她都感觉妙不可言，惟一的遗憾是，她从来不知道老公的感觉。有时，她会甜蜜地问：这样舒服吗？那样好还是这样好？可得到的回答永远是支支吾吾，或者是“都好，你觉得好就好。”天啊，这让安觉得他只是在为她服务，自己很没有成就感，因为安不知道自己在床上到底行不行。这不是可笑的话题，女人也会在意男人的看法，也会用自己性不性感来维系良好的心理感觉。可以说这是女人的秘密吧。
可是，很多男人天性使然，不懂得与自己的爱侣交流。那么，我们不妨将自己看作性商更高的性别，让我们来引导对方聊聊的话题吧。
方法有三：
不要严肃，要轻松
在讨论过程中，情与爱要贯穿全过程。离开情与爱，讨论就会变得枯燥而乏味，令人大倒胃口。因为，夫妻之间的性讨论，毕竟不是专家在学术会上的讨论呀！除性生活过程之外，只要在夫妻二人感到方便的时候，如清晨迎着花香晨露一起漫步，黄昏披着夕阳并肩缓行在林荫路上……当然也可以在自己家里，入睡和起床之前，都是讨论的适宜时机。用机俏和调皮的语气最动人，用撒着娇的方式而不是指责的态度，效果最好。
来一点示范
首先自己要了解和掌握必要的性知识，一对性盲夫妻不仅讨论不好性问题，而且还会越讨论越糊涂，甚至误入歧途。在知识准备上应多下些工夫，学在前头，然后再身体力行。如果你觉得直接对他讲有点别扭，可以用点小技巧，比如将杂志放在他的书桌上或是他必看的文件中，确定他看过了后，在亲密时分再和他探讨，可以起到事半功倍的作用。有时，可以找一些唯美的影碟来共同欣赏，这时也可以教育你的他并且让他自己领悟，有十二分的效果呢！
把它变成一种习惯
爱侣间的性讨论必须建立在融洽和深厚的感情基础上。感情不深，平时很少谈心，就不可能讨论性事，同时若没有平等相爱的氛围，也不可能达成双方满意的一致性。因此，不断深化感情，养成相互谈心、交心的好习惯才能将所有问题化解在无形中。最好的做法是，在亲热之后，双方若不感到疲劳时，由女性来引导出这个话题，以赞美开头，说说你的他今天有什么特别让你喜爱的地方，然后告诉他，要是能够怎样会更好，同时，用温柔的方式探问他对你的每一种爱示的感觉。要知道，有些男人只有在极度放松和亲密的状态下才能透露自己的性喜好，虽然你是他终身要面对的女人，他也会害怕你的嘲笑和不理解。
关键词：入唐求法；新罗僧侣；译经；佛教文化交流
7－9世纪末，朝鲜半岛与唐朝佛教交流频繁。7世纪初入唐求法的新罗僧侣，参与玄奘法师领衔的佛经翻译事务，对佛教宗派的发展、教义的传播做出了重大贡献。8－9世纪来华的新罗僧侣，有的将唐朝作为中转站，前往印度求法取经；有的跟随中国名僧大德研习经论，学成返回新罗，对形成新罗九山禅门奠定了基础；有的终老于唐。到目前为止，中韩学界对这一时期佛教文化交流的诸多问题，已有一定的研究。鉴于各个时期新罗僧侣入唐的动因、在唐活动区域，以及对佛教文化交流所做贡献互不相同，本稿力图在现有研究基础上，通过对入唐新罗僧侣关联问题的疏证，发掘僧侣们为探索真理不畏艰险的高尚品质，探讨其对中韩佛教交流所做的贡献。
一、入唐求法僧侣关联问题考述
1、人唐新罗僧侣的数目
7－9世纪末近300年间，众多的新罗僧侣不畏艰难险阻，辗转来到唐朝，为唐与新罗佛教的发展做出了重要贡献。关于人唐新罗僧侣的人数，因研究者收集资料的限制，所得出的结论存在差异。朝鲜后期李能和编撰的《朝鲜佛教通史》一书，统计6世纪末到10世纪初380年间人华僧侣共64人，那么，人唐的新罗僧侣人数肯定更少。严耕望《新罗留唐学生与僧徒》一文中指出，“新罗留唐僧徒之法号可考者已逾一百三十人”，他还引用《传灯录》卷36《杭州慧日永明寺智觉禅师延寿传》、《全唐文》卷69《九华山化城寺记》等史料，认为“半岛僧徒人唐求法者之众多，绝非列举所能罄尽也”。黄心川认为：“据本文作者多方搜集统计共得117人，其中未见朝鲜史籍的约有二十余人。”刘素琴指出“这三百年间，入华求法在新罗几乎成为一种时尚。据不完全统计，仅唐之世，见于中、朝、日三国史籍的新罗来华僧人即有160余人之多。这些僧人来华之后，如饥似渴地学习研究中国佛教诸宗的教义和戒律。”陈景富在《中韩佛教关系一千年》、《心语无说》两书中，依据各种资料统计出入唐新罗僧俗有181名。而据说韩国檀国大学校退休的郑守一教授竟然统计出约400余名的入唐僧侣(不知以何为据)。对照以上看法，因统计的趋向和侧重点的差异，其结果亦各有千秋。李能和的看法局限于当时所见，他认为近300年间只有60余新罗僧侣到达中原，代表了当时的研究水准。严耕望只是统计有法号的新罗僧侣130人，并对以后可能新发现的新罗僧侣埋下伏笔。黄心川统计出入唐新罗僧侣117人，因此文发表在严耕望论文之后，可能当时并未看到严文，故其统计仍有增多的空间。刘素琴统计出300年间有160余名新罗僧侣人唐，只是文章中未见具体的统计，故难于确认较上述诸研究者研究进展的程度及状况，即多出的30余名入唐新罗僧侣情况如何无从得知。可以说，陈景富的统计，是现在看到最周密的人唐朝鲜半岛僧侣的统计人数。不过，陈先生的统计仍有值得说明和辩证之处：其一，他统计的是“僧俗”，而非僧侣，即其中包括了例如金思让、张保皋、崔致远、崔彦为等人。其二，统计中包括了高句丽、百济入唐僧侣，例如道登、玄游(高句丽)、崇济(百济)。其三，统计中有僧侣如海，而如海应该是在唐高句丽遗民后裔，似不应计算在入唐新罗僧侣之中。其四，统计中有高句丽僧信诚，且不说此人为高句丽僧不应计算在入唐新罗僧侣之中，而查阅现有记载，此人高句丽灭亡前并没有机会人唐求法。只是在唐朝联合新罗灭亡高句丽的战斗中，他作为高句丽平壤城的总指挥坚决抵抗，后来在泉男生等人的劝诱下，打开平壤城门，使罗唐联合军顺利进入，进而很快结束了这场战斗，信诚人唐后被授予银青光禄大夫。其五，近年来发现的唐人墓志铭中也有新罗僧侣的事迹，应该将其记录在案。综合以上五点因素及其他，本稿仍以陈景富的统计为底本，参照严耕望的研究，以及近年来出土的《李训夫人王氏墓志》，《全唐文》卷447所载新罗僧侣良，日出等，最终得出新罗人唐僧侣的相对数字为157人。相信随着新资料的不断发现，仍然会有新的新罗僧侣需要纳入。
2、入唐新罗僧侣的译经活动
关于入唐新罗僧侣最早参与唐朝译经活动，《续高僧传》卷4《京师大慈恩寺释玄奘传》、《大唐大慈恩寺三藏法师传》两书均有记载。其中后者记载颇详：“三月己巳，法师自洛阳还至长安，即居弘福寺将事翻译，乃调疏所需证义、缀文、笔受、书手等数，以申留守司空梁国公玄龄。玄龄遣所司具状发使定州启奏，令旨依所须供给务使周备。”经过严格选择，当时享有盛誉的证义大德12名，即长安弘福寺灵润、文备，罗汉寺慧贵、实际寺明琰，宝昌寺法祥，静法寺普贤，法海寺神8方，廓州法讲寺道深，汴州演觉寺玄忠，蒲州普救寺神泰，绵州振乡寺敬明，益州多宝寺道因；缀文大德9人，即栖玄、明溶、辩机、道宣、静迈、行友、道卓、慧立、玄则；字学大德玄应，证梵语梵文大德玄暮，自余笔受、书手等僧侣一并到位。这次译经活动，是中国历史上由著名僧侣发起，国家重视的第三次大规模的佛经翻译，完善了国家翻经馆(院)体制下佛经翻译工作流程和责任体制。随后宋人赞宁编撰的《宋高僧传》卷3，以及《佛祖统记》卷43中，对翻译流程及责任体制有详细记载。首先译主是统筹规划译经责任者，负责选定经书，制定译经计划，具体指导、把握译经事宜；其次是坐在译主左边的证义，担当和译主评议考量梵文经书，以及坐在译主右边证文，听译主高读梵文，检查是否有误；第三是精通梵文和汉语的僧侣，他审听梵文，并将梵文转换为汉字，但仍然是梵文的音韵；第四为笔受，即将已经转换为汉字的梵音改为汉文；第五为缀文，即将转换的汉字连接成为完整的汉文句子；第六为参译，即对证原梵文经卷和翻译后的汉文，指出其中可能存在的错误；第七为刊定，其职责是修改删补译好的汉文，捋顺上下文意思；第八为润文，就是润色上述翻译的汉文经，最终改定成书。当然，以上只是译经院(场)具体担当者，一般还要有一个监护官(宰相)，负责译经的后勤保障。可见，要将梵文经书翻译为汉文，是要经过一系列专门人才协同合作，政府全权支持方能毕其功，任何个人都只是译经群体中的一分子。
入唐新罗僧侣中神昉、圆测、智仁、胜庄、慧超、无著、慧日、玄范等人，先后参与玄奘及此后义净、菩提流志、金刚智、不空等人主持的译经活动。神日方作为玄奘的四神足之一，以证义身份参与玄奘主持的译经；圆测则担当过证义、笔受，胜庄也是负责证义。有学者统计上述新罗僧侣参加译经工作量，指出“唐代译出的佛典总数为2159卷，其中1273卷包含着这8位新罗僧人的心血和智慧，约占总译量的60％，仅从这些数字，就可看出他们对唐代佛教乃至对中国文化史的贡献。”有韩国学者进一步演绎认为“这些人参与译经占玄奘、义净时代翻译佛经总数的60％”。显然，韩国学者的说法已经和原统计有了一定的差距。如何认识界定这种统计?首先，依上文所论，唐初译经场译经，是由唐廷统一组织，玄奘、义净等精通梵、汉文高僧领衔，由宰相监护，统辖富有一技之长的众多高僧参与的集体项目，它是一个有机统一体，更由于涉及不同的专业门类，使得任何个人均不能单独完成或导出由梵文到汉文经书的转变。因而，上述的统计方法本身似乎并不科学，并容易使人产生疑义。其次，刘氏论文中统计唐朝翻译佛经总卷数，学界存在不同的统计数字，如陈景富统计自唐初到贞元年间，所出经典共435部，2476卷，按照新罗人唐僧侣参与翻译经卷1 273卷计算，所得出的百分比就明显不同。其三，毫无疑问，以神日方、圆测、胜庄为首的新罗入唐僧侣，他们少小入唐，接受汉文及佛教教育，进而以过硬的语言才能和高超的佛学修养，被选配参与唐朝名僧大德主持的译经活动，为唐佛教文化的传播做出了重大贡献。神昉、圆测、智仁、慧超、无著、玄范等6人，他们的生活习惯、为人操守，随着岁月流逝，沐浴在大唐开放包容的国度，成为大唐社会的一员，以至于后来老死于唐朝。他们原籍新罗无法改变，但如过分强调他们的国籍，正如我们现在强调菩提流志为印度人，玄奘是中国人在印度一样，似乎意义并不大，或许能够满足时人的一时所好，或许只是现实的需要而已。同时，新罗僧侣在唐翻译佛经的贡献并没有什么疑义，难道我们一定要用一个模糊的百分比，强化翻译佛经僧侣的国籍所在，但对终生托付的佛教事业，最后圆寂于异国他乡的事实却笼统触及。而事实上这种百分比统计上的瑕疵，反而不利于正确估价他们对佛教传播的巨大贡献，这些都是应当引起重视的事情。
二、入唐新罗僧侣在唐活动考论
1、入唐新罗僧侣参与官方交涉
第一，人唐僧侣作为一个特殊群体，在唐罗双方关系的特殊时期，起到了十分重要的作用。贞观十年(636)，慈藏受新罗善德女王派遣，渡海辗转来到长安学习律宗，到五台山感应文殊菩萨之箴言，还得到神人的明示，其内容无不和新罗国家的发展及面临的问题有关。后慈藏在终南山云际寺之东崿“驾岩为室”修行三年。贞观十七年(643)，善德王请求唐太宗，慈藏得到准许后才返回新罗。回国前唐太宗亲自接见慈藏，“赐经像袈裟币帛”，“诏许引入宫，赐绢一领、杂彩五百端；东宫亦赐二百端，又多礼贶。藏以本朝经像未充，乞斋藏经一部，洎诸番幢花盖，堪为福利者皆载之”；“引藏人宫，赐纳一领杂彩五百段，东宫赐二百段；仍于弘福寺为国设大斋，大德法集，并度八人，又敕太常九部供养。藏以本朝经像雕落未全，遂得藏经一部，并诸妙像幡花盖具堪为福利者，赍还本国”。返回新罗后，慈藏建议在皇龙寺建造九层塔，善德王完全照办，落成的皇龙寺塔成为新罗“护国三宝”之一。慈藏还极力促成新罗改穿中国服饰，使用唐高宗永徽年号，增进了唐朝与新罗官方关系的发展。
龙朔二年(662)，新罗文武王派遣僧侣义湘入唐求法。义湘从登州上岸到达长安，后投到终南山至相寺智俨门下，学习佛教华严经。咸亨二年(671)，义湘返回新罗。关于义湘离开唐长安前的活动，《三国遗事》有不同记载。其中就有义湘返回新罗之前曾接受金仁问(金良图)指派，顺便为新罗王室传递情报。对于此记载，笔者在《金仁问研究中的几个问题》中已有涉及，认为作为僧侣，在当时的情况下，义湘获取唐朝所谓军事情报的机会远远高于被囚禁的金仁问或金良图，《三国遗事》有关记载值得怀疑。但无论如何，在罗唐关系最为紧张的时刻，义湘选择返回新罗，很可能和他的政治意向有关。义湘返回20余年之后，与他同门的唐朝僧人法藏，托另一人唐返回新罗的僧侣胜诠带书信给义湘，追忆在唐求法历程，言真意切，成为中韩佛教文化交流的佳话。
和义湘几乎同时的还有琳润法师。据《三国史记》卷7记载，此人担当大唐总管薛仁贵信使前，是“王(新罗王)所部僧”。琳润法师事迹史书缺载，故对于他担当信使也只能通过其他背景史料作一探讨。其一，琳润人唐求法后归化唐朝，和唐罗双方均保持一定的关系，后在薛仁贵军前接受差遣，他原则上并不排斥担当这一任务。其二，是否薛仁贵出征前临时抓差，作为新罗人的琳润法师被迫无奈从军充当信使，他在军前奔波并非自愿。其三，可能是薛仁贵进入新罗境内，为了彰显出征的正义，在当地随便擒拿知书晓理，此前曾入唐求法的僧侣担当信使，前往新罗王廷。笔者认为第一种推测可能性较大。因为琳润不仅将薛仁贵的书信传到新罗王城，而且还将新罗文武王金法敏的回信带回，进而完成使命。他应是入唐的新罗求法僧侣之一。就是说，琳润法师充当信使，在当时僧侣作为知识垄断阶层之一的大背景下，特别是在一些文化较为落后的地域，他们在国家政治生活中所起的作用当是非同寻常的。同时也可看出，在唐新罗佛教界人士面对当时罗唐双方的摩擦对峙，义湘选择了即刻回国，而琳润则在薛仁贵军前效命，呈现出不同的价值趋向。
《三国遗事》卷3记载的明朗法师更是如此。明朗法师善德王元年(632)人唐求密法，贞观九年(635)返回新罗。据载明朗在返回新罗前曾应龙王之请，到龙宫传授密宗法术。高句丽灭亡之后，罗唐关系猝然紧张，面对唐朝的问罪之师甚嚣尘上，新罗王想到用密宗神法化解面临的困境。明朗上奏“狼山之南有神游林，创四天王寺于其地，开设道场则可矣。”而且“乃以彩帛营寺，草构五万神像，以瑜伽明僧十二员，明朗为上首，作文豆娄密之法。”结果使得唐罗军将未及交战，“风涛怒起，唐舡皆没于水”。且不说《三国遗事》利用的乡传、口述资料是否可信，也难明了明朗法师利用密宗法术作法对付唐朝的兵船是否奏效，抑或是巧合唐军确实失利，但在新罗面临唐朝大兵压境的现实状况下，明朗法师站了出来，用从唐朝所学到的非凡法术咒语，解除国家的危困，体现了新罗护国佛教的本质，也从另一侧面解读作为国家一分子的僧侣，在新罗统治集团内部的重要作用。
第二，人唐新罗僧侣担当使节，为罗唐双方的交涉建功立业。元和年间，著名诗人白居易担当翰林学士，现存《白居易集》卷56中收有元和元年的一道敕书。该敕书载云：“敕新罗王金重熙、金献章及僧冲虚等，至省表兼进献及进功德并陈谢者具悉。卿一方贵族，累叶雄才，仗忠孝以立身，资信义而为国；代承爵命，日慕华风。师旅叶和，边疆宁泰。况又时修职贡，岁奉表章，进献精珍，忠勤并至。功德成就，恭敬弥彰。载览谢陈，益用嘉叹。沧波万里，难隔于海东。丹慊一心，每驰于阙下。以兹嘉尚，常属寝兴。勉宏始终，用副朕意。今遣金献章等归国，并有少信物，具如别录。卿母及妃并副王宰相以下，各有赐物，至宜领之。冬寒卿比平安好，卿母比得和宜，官吏僧道将士百姓等，各加存问，遣书指不多及。”此敕书又见《全唐文》卷665。不过《三国史记》中作“金宪章”，而《白居易集》及《全唐文》作“金献章”，“宪”、“献”中文与韩语发音均相同，因白居易所作诏书在先，故笔者以为新罗所派王子当为“金献章”。同时《三国史记》言明是新罗宪德王即位第二年派使入唐，但白居易起草的唐宪宗敕书中却题为“新罗王金重熙”，况且，宪德王杀侄儿金重熙(哀庄王)登上王位后很快就人唐告哀，唐朝也派使吊祭册封，诏书中不可能仍然写已经去世的金重熙，是《三国史记》将此条史料排列推后，还是如韩国学者所云《三国史记》中纪年有问题，或者上述诏书本身传写时出现错误，抑或是《三国史记》所载与白居易所作诏书完全就是两件毫不相关的事情?文中姑且认为《三国史记》时间排列出现问题。但无论如何，上述敕书中提到僧侣冲虚其人，他担当新罗入唐使节，“省表兼进献及进功德并陈谢”，在新罗佛教界处于什么地位，新罗王派他入唐有何用意，他入唐是否还担当和佛教关联的使命?因史书缺载，难能作论。
第三，入唐求法僧侣因各种原因得到唐朝皇帝召见，显示出佛教交流在唐罗关系中的重要地位。上述唐太宗亲自接见慈藏，赐予佛教典籍，皇太子李治也赐予相关物品，其用意相当明显。一方面唐太宗肯定慈藏在唐求法所取得的成就，另一方面当是在唐与高句丽摩擦对峙，新罗备受百济、高句丽压力的现实背景下，对以佛教立国，新罗王特别器重的佛教人士予以照顾，也是唐太宗父子强化与新罗已有的友好关系，牵制高句丽的用意所在。
8世纪中叶入唐新罗僧侣无相，以及随后的无漏法师，受到唐玄宗、唐肃宗父子的厚爱。据现存《宋高僧传》等书记载，无相为新罗王第三子，在新罗就已剃度，开元十六年(728)入唐。此时新罗圣德王在位(703—737)。圣德王在位30余年间，曾经派遣入唐使者40次，其中包括王弟金钦、金嗣宗，王子金守忠，王侄金志廉、王族(或为“侄”)金志满，从弟金相等人，唐玄宗确实也接待过金守忠、金志满、金志廉等，只是现存《三国史记》、《三国遗事》等史书并没有记载身为王子，且已经剃度的无相入唐事宜。无相宝应元年(762)圆寂，享年79岁，如此推算其生年当为公元684年。就是说，新罗神文王金政明在位期间无相已经出生。依照上述史书记载推算，他可能是神文王的儿子，即是圣德王的兄弟。神文王死后太子理洪继立，是为孝昭王；而圣德王隆基为神文王第二子，继其兄孝昭王而立。另据记载，无相到达成都后，因“相之弟本国新为王矣，惧其却回，其位危殆，将遣刺客来屠之，相已冥知矣”，似乎证实了无相为新罗王子之事实。但事实并非如此。其一，无相人唐前已经落发为僧，开元十六年入唐，此时圣德王已经在位25年之久，根本不存在无相返回威胁其王位之可能。其二，与上述理由相类似，孝成王738－742年在位，此时无相入唐已经10年，孝昭王在位也已10年；景德王743－765年在位，更不存在无相威胁王位的事情。其三，无相人唐时间已久，而且已经到达边远的剑南道，并且专心修禅，唐罗关系空前密切，新罗王派人暗杀一个以苦行修道的和尚，似乎很勉强。其四，说有刺客行刺，无相并早已觉察，更是让人觉得玄而又玄。笔者认同《历代法宝记》的记载，即“无相禅师，俗姓金，新罗王之族，家代海东”。就是说，无相和新罗王室有一定的关系，也可能是新罗王的远房，但他并非所谓的新罗王第三子，入唐后也根本不可能对新罗王位造成什么威胁。无相到达唐都长安后，受到唐玄宗的召见，并将他安置于禅定寺。后无相辗转来到四川成都保唐寺，传承了从弘忍到智诜、处寂的禅学衣钵。无相每年“十二月、正月，与四众百千万人受(授)缘，严设道场，处高座说法。先教引声念佛，尽一气绝，声停念迄。”在禅法上突出“无忆、无念、莫忘(妄)、(无)(妄)”，此三句学说与三学，即戒、定、慧相配合，形成著名的“三句用心”的禅法传授仪式，产生了重大的影响。天宝十五年，安史之乱爆发，唐玄宗仓惶逃亡剑南道首府成都，在成都又一次见到无相。此时无相声名显赫，唐玄宗以礼相待，在当时传为佳话。无相临终前将衣钵传与无住和尚，其传承更具传奇色彩，成为佛教衣钵传承的典范。就是说，无相人唐后经过进一步的修行，成为佛教界声名显赫的人物之一，受到唐玄宗的器重；他不仅传承了自弘忍、智诜以来的修佛仪式，而且有所创新，对于佛教禅宗的发扬光大做出了重大的贡献。
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唐懿宗以佞佛而著名，在位期间迎法门寺佛骨舍利到达京师长安，成为唐代声势浩大、供品繁多、耗费空前的一次迎佛活动。唐懿宗在位14年间，人唐新罗僧侣人数众多，而懿宗皇帝与入唐的新罗僧侣也有交往。查阅《旧唐书》卷19上，《资治通鉴》卷252等文献记载，并没有发现咸通十一年(870)唐懿宗接见新罗僧侣之事，但《新罗国故两朝国师教谥朗空大师白月栖云之塔碑铭》(崔仁滚撰)却有详细记载。关于朗空禅师受到唐懿宗接见关联问题，笔者在其他论文中已有论述，在此不赘。
2、入唐新罗僧侣求法巡礼
人唐新罗僧侣历经艰险到达唐朝，在惊涛骇浪中，在漫漫沙漠戈壁中，在孤寂无聊和艰难困苦中，他们用坚强的毅力和一腔热血，在陌生的国度，付出了常人难以忍受的艰辛。新罗著名僧人元晓“尝与湘法师入唐，慕奘三藏慈恩之门，厥缘既差，息心游往。”《宋高僧传》卷4记载了元晓、义湘两人入唐受阻之情况。义湘最终到达唐朝，元晓则平生在新罗修行著述。就是说，要入唐求法，必须有矢志不移的决心，如稍有动摇，就会前功尽弃。当然，元晓大师在新罗也取得了令人瞩目的成就。新罗中代的朗慧大师无染，随新罗使节入唐，“及大洋中，风涛欻颠怒，巨煸敕人，不可复振。大师与心友道亮跨支板恣业风，通星半月余，飘至剑山岛(即黑山岛，在今山东省长岛县)口行之碲上。”对此，大师“怅然甚久日：‘鱼腹中幸得脱身，龙下颔庶几攙手，我心非石，其退转乎!也就是说，这次经历惊涛骇浪，生命艰危，但只是功亏一篑，并没有到达目的地。对此，无染禅师意志坚决，绝不放弃，终于在长庆初年，获便搭乘新罗朝正使金昕赴唐朝正的船只，到达唐朝登州。新罗瑞云寺了悟禅师于大中十二年(858)“私发誓愿，拟游上国，随入朝使利涉云溟，乘一支之船，过万重之浪，曾无惧念，不动安禅”，到达唐朝。月光寺圆朗禅师咸通七年“投回易使陈良付足东来。时乃波涛腾涌，烟霭昏沉，舟楫有倾覆之虞，僧俗口口溺之患。师乃略无俱口……若非神通妙用，智识遐周，履险不惊，孰能至此。”除此之外，真鉴禅师、普照禅师、真澈禅师、法镜禅师等众多的新罗僧侣亦先后乘船入唐，求法巡礼，为新罗佛教的繁荣做出了重大贡献。不仅如此，也有僧侣在往返唐朝过程中，葬身大海。如公元831年2月，新罗兴德王遣王子金能儒及9名僧侣入唐，顺利完成使命后于当年7月返回，但在返回途中全部溺海身亡。此可能是入唐新罗僧侣葬身大海损失最惨重的一次。
入唐后的新罗僧侣同唐朝僧人一样，踏上了西去印度的历程，一些人命丧漫漫路途。据陈景富先生统计义净《大唐西域求法高僧传》记载，唐初赴西域求法的高僧共56人，其中8人为新罗人，这就是慧轮法师、玄恪法师、慧业法师、阿离耶拔摩法师、玄太法师、求本法师，以及没有留下姓名的两位新罗僧人。此8人中，只知道求本法师曾赴天竺，其余事迹不详。另外，除过玄太法师从西域艰难返回唐朝，其余诸人或死于印度，或死于返回途中，或下落不明。如慧轮法师贞观中作为唐僧玄照的随从西游天竺，玄照奉敕返回后，慧轮先在信者寺驻留7年，后在吐火罗寺院，义净曾见过这个和尚；慧轮精通梵文，“薄闲《俱舍》”，随后事迹不见于史书。而没有留下姓名的两位新罗僧侣，他们和义净和尚一样，是从海路赴印度，病死于求法途中。在此后的岁月中，西域求法的新罗僧侣仍大有人在，其中见于各种记载的有慧超、无漏、元表、悟真等人，而慧超其人及其著作的面世，使他成为新罗入唐僧侣赴西域求法当之无愧的代表人物。据《一切经音义》、《代宗朝赠司空大辩正广智三藏和尚表制》等文献记载，慧超10余岁入唐，开元七年(719)从海路赴印度求法巡礼，开元十六年(728)从陆路返回长安。在随后的几年中，他整理随行记录，撰成一部《往五天竺国传》。《往五天竺国传》残卷，1905年法国人伯希和从敦煌石窟中掠取并公诸于世，进而引起各国研究者的广泛兴趣，成为继玄奘《大唐西域记》之后的又一部记载西域沿途乃至当时印度历史地理的重要著作。据载，慧超后来以不空三藏为师研习密宗，驻留大兴善寺。唐代宗大历九年二月，慧超曾在内道场撰写了《贺玉女潭祈雨表》。建中元年(780)，慧超赴五台山乾元菩提寺修行，最终圆寂于该寺，享年85岁。无漏、元表两人天宝年间分别从陆路前往西域，无漏可能因身体的原因中途返回，并在安史之乱中和唐玄宗、唐肃宗父子过从甚密；元表返回唐朝后前往闽越习华严经，一直到唐武宗毁佛之时，其人似乎仍然健在，并对佛经的保存做出了贡献。悟真于唐德宗在位初经吐蕃至中天竺求取《大毗卢遮那经》，贞元五年(789)原路返回，不幸死于吐蕃境内。
在唐朝巡礼求法的新罗僧侣，除过上述从事佛经翻译、赴西域求法、在唐求法后返回新罗者之外，能够传名后世者毕竟不多，众多的僧人为了修成正果，过着孤寂而默默无闻的生活。如唐昭宗景福二年(892)入唐，前往天台山平田寺的道育。据载：道育“慈爱接物，然终不舍岛夷音言。恒持一钵受食，食讫，略经行而常坐，胁不著席。日中洒扫殿廊，料理常住，得残羹之食，虽色恶气变，收贮于器，斋时自食。与僧供浴煎茶，遇薪木中蠢蠢，乃置之远地，护生偏切……凡对晤宾客，止云伊伊二字，殊不通华语。然其会认人意，且无差脱。”从上述记载可以看出：其一，此僧人唐求法，但不学唐朝语言，确实令人不解。此为特例，还是具有代表性，不得而知。其二，道育可能是修头陀苦行僧，能吃苦耐劳，而且很注意保护生灵，常常在夏日以身伺蚊虫。其三，或许是在中土时间很久的缘故，虽然他只能发出“伊伊”两声唐音，但能够懂得对方的意思，很少出现差错。道育的经历，显示出众多的新罗僧侣入唐，僧侣中文化构成、家庭背景、人唐的具体原因等呈多样化，相信和道育有相似或相近经历，名字没有传下来者当不会少。金地藏为新罗王之族人，入唐到达池州九华山，“乃径造其峰，得谷中之地，面阳而宽平。其土黑壤，其泉滑甘，岩栖涧汲，趣而度日”。他整日苦苦修行，至德初被人在石室中发现，当地百姓在原地为他建造伽蓝；地方官闻风前来，奏请在其地成立寺院。地藏的声名从此传扬天下，“本国闻之，率以渡海相寻，其徒且多，无以资岁”。贞元十年(794)夏圆寂，享年99岁。此后，金地藏作为九华山地藏道场的开山祖师，成为中国佛教信仰体系中著名的菩萨。
3、人唐集中居住的新罗僧侣
入唐求法新罗僧侣集团居住，当以山东半岛登州文登县赤山法华院为代表。日本请益僧圆仁开成四年(839)六月初到达文登县赤山浦，在张保皋所建赤山法华院居住超过一年。据圆仁记载，这个寺院有常住僧侣30余人，均为新罗人。寺院有很大的讲堂，每年夏秋两季都举办讲经法会，一般可容纳200余人。法华院的讲经礼忏、讲经仪式均极为独特，杂糅唐罗双方的特点，如“讲师上堂，登高座间，大众同音称叹佛名，音曲一依新罗，不似唐音。讲师登高座讫，称佛名便停。时有下座一僧作梵，一据唐风，即‘云何于此经’等一切偈矣。至‘愿佛开微密’句，大众同音唱云‘戒香、定香、解脱香’等。”就是说，由于赤山法华院所处唐罗交往要冲，以及建成时间短暂等原因，新罗僧侣人等除保留自己的生活习惯，如重视八月十五节之外，其讲经杂糅唐朝与新罗多种成分，显示出文化的交融和互补。当时在青州及淄州长山县均有新罗院，相信那里的新罗僧人也不会少。但是，由于唐武宗的毁佛，圆仁会昌五年九月路过时，“本意拟住赤山院，缘州县准敕毁拆尽，无房舍可一居，大使处分于寺庄中一房安置”。可见，由新罗人建立，僧侣集团居住的赤山法华院此时已不复存在。
唐朝金州有一座新罗寺，相传该寺建造于贞观年间。贞观十年(636)，新罗僧人慈藏与门人僧实等10余人入唐。入唐后慈藏在终南山修行，僧实则偕使者随从来到金州(陕西安康市)，看到汉江眷恋不舍，因请立寺以遣乡思。贞观十三年(639)，金州刺史段志玄在汉江边建成一座寺院，并题其额为“新罗寺”。如上文所述，贞观十七年(643)慈藏返回新罗，按照一般情况，僧实应该随慈藏返回，但他可能并未随行，而是长期居住金州，这样才有新罗寺的繁荣和驰名于世。因为中韩现存史料中并未记载僧实其人返回新罗。同时，从新罗寺遗址考古发现得知，寺院残留的“两个石赑屃当为新罗寺大殿正门两侧的碑座，二者距离基本未变，大约在8.5米左右，由此可以推知新罗寺正殿大门石台阶的宽度。据碑座的位置，可知新罗寺大殿的方向是坐西南朝东北，即朝着朝鲜半岛方向。”韩国庆州所在的四天王寺遗址南端，也有两个残赑屃存在，与此相联系，金州新罗寺的建造是否夹杂新罗寺院建造方式，抑或因为有新罗僧侣参与才如此?因没有文献史料佐证，实在难于做出准确论断。
元和十二年(817)，时为江州司马的著名诗人白居易，与友人河南元集虚、范阳张允中、广平宋郁、安定梁必复、范阳张特，东林寺沙门法演、智满等17人游历庐山，“自遗爱草堂历东西二林，抵化城，息峰顶，登香炉峰，宿大林寺”。就是这个大林寺，因为“穷远，人迹罕到。环寺多清流、苍石、短松、瘦竹，寺中唯板屋木器”，而令人惊叹的是大林寺的僧人全是“海东人”。众所周知，唐代新罗人亦称海东人，就是说，这个偏僻简陋寺院中的僧人全是新罗僧人。白居易没有说明这些新罗僧侣有多少人，但从“其僧皆海东人”语句看，不可能只是两三人，似乎应该在5人以上。因为大林寺深处山巅，和山下环境迥然相异，虽然离山门只有半日的路程，但数十年来很少有人光顾。这些新罗僧人如何找到这里?他们在寺院中如何生活?从白居易的叙述中，可以看出这些新罗僧侣在此修行，主要是看中庐山大林峰下安静自然的环境。
除上述三处之外，在京师长安的众多寺院中，新罗僧侣集中居住也不会少。唐武宗会昌五年(845)开始了大规模的毁佛行动，新罗僧侣亦未得免。据圆仁《入唐求法巡礼行记》载，会昌三年正月二十八日，外国在唐京师僧人前往主管僧侣事务的军容使衙，其中有“青龙寺南天竺三藏宝月等5人，兴善寺北天竺三藏难陀一人，慈恩寺师子国僧一人，资圣寺日本国僧三人，诸寺新罗僧等，更有龟兹国僧，不得其名也，都计廿一人，同集左神策军容衙院。”韩国金文经教授由此认为当时有10名新罗僧人参与了这次会见活动。应该说明的是，这10人只是左神策军衙门，即左街功德使所辖范围寺院中新罗僧人之数字，京师所在寺院新罗僧侣人数当不至于此。会昌五年三月，“又敕令天下诸寺，僧尼年四十以下，尽勒还俗，遞归本贯”几天之后，敕令“天下僧尼五十以下，尽勒还俗，遞归本贯讫。后又敕云：天下僧尼五十以上，无祠部牒者，尽勒还俗，遞归本贯；有祠部牒者，委当州县磨勘，差殊者尽勒还俗，遞归本贯。……”这些只是针对唐朝境内僧尼的裁汰办法，很快，对于藩属国及域外国家在唐僧尼也采取了相应措施。“外国僧未人条流之例，功德使别闻奏取裁。有敕云‘外国等僧，若无祠部牒者，亦勒还俗，遞归本国者’。”圆仁提到北天竺三藏难陀、南天竺国僧宝月，而“新罗国僧亦无祠部牒者多”，即在长安的众多新罗僧侣没有部牒。其中还有一长安年轻僧侣，少小受度为僧，“在大荐福寺侍奉新罗僧为师匠，因僧难，承接新罗僧名字，得住寺。官家随其公稔，遞向新罗国去。在府之时，百万作计申诉，不免遞过，亲情啼哭，街中相别……”就是说，这个长安小和尚，在大荐福寺以新罗和尚为师，因为会昌毁佛，他假冒他的新罗师傅的姓名，留驻寺院。随着毁佛风声日紧一日，长安小和尚终于被查了出来，并因名牒的缘故，错把小和尚当成他的新罗师父，遣返新罗。此小和尚趁乱逃脱，返回城中躲藏，这桩罗唐佛教关联的事件才告一段落。圆仁到达海州之后，请求在海州寻找船只返回日本，但当地官员予以拒绝，云：“近日新罗僧亦从京兆府近来，请于当州权，使君不肯，便遞过。和尚请停住事，亦应难，然县司不自由，事须经使君通状。”此记载说明三点，其一，在圆仁到达之前，已有从京兆府西来的新罗僧侣路过海州，请求从海州缘边下海回国，但未得到批准。其二，处理如此重大的事情，决定权掌握在当地“使君”手中。其三，因在京兆府的新罗僧侣人数众多，这次路过海州回国者肯定不少。以上均为圆仁所撰行记中所述，而当时著名的新罗入唐僧侣中，一些重要人物也是此一时期返回新罗的。如唐穆宗长庆初入唐的朗慧禅师，在唐20余年，巡礼终南山至相寺、五台山佛光寺，拜谒当时富有盛名的如满禅师、宝澈和尚等，会昌五年返回新罗，其塔铭明确记载他返回新罗是“帝命也”。慈忍禅师、道义禅师也是这一年回到新罗的。显然，他们都是因会昌毁佛的缘故回国的。
4、入唐新罗僧侣与新罗九山禅门的兴盛
唐中后期，入唐新罗僧侣钟情于江浙等地的寺院，将佛教禅宗传人新罗，对形成新罗九山禅门做出重大贡献。关于此问题，中韩学界已有相当多的论述，这里只是对其中关联问题试作爬梳。
道义禅师建中五年(784)人唐，长庆元年(821)返回，在唐驻留达37年之久，他将禅宗南派西堂智藏学说传回新罗，并经过廉居、体澄两禅师的进一步弘扬，最终形成新罗九山之一迦智山禅宗学派。
洪陟、惠哲两人和道义一样，入唐求法，并同样接受西堂智藏禅宗学说。洪陟创立了实相山禅门，惠哲则创立了桐里山禅门。
真鉴禅师慧昭贞元二十年人唐，至沧州拜谒神鉴法师，两人一见如故。此后赴嵩山少林寺，又临终南山“登万仞之峰，弭松实而止观，寂寂者三年”。大和四年返回新罗，进而创立了智异山禅门。
综合《景德传灯录》、《祖堂集》等史料记载，何劲松氏认为玄昱禅师元和四年(809)入唐，在唐逗留28年以上，向唐僧怀辉学习禅宗。开成二年返回新罗，受到新罗闵哀王、神武王、文圣王、宪安王的礼敬，创立了凤林山禅门；此后另一僧侣审希继承了玄昱学说，将凤林山禅门发扬光大。
道允创立了师子山禅门。道允长庆五年(825)入唐，投入南泉寺普愿禅师门下学法，大中元年(847)返回新罗，在唐逗留20余年。道允回国后传禅20余年，其继承人为折中禅师，两人对于新罗师子山禅门的建立做出了重要贡献。
无染创立的圣住山禅门。无染入唐前就到新罗名刹寺院求法巡礼，长庆初年入唐，先到终南山至相寺求法，又到东都佛光寺向名僧如满问道，受到如满的赞赏；他还拜谒宝彻法师，收益良多。因唐武宗毁佛，会昌五年无染返回新罗。无染驻留于圣住山，成为新罗下代禅宗发展的典范。
梵日、行寂创立的阁崛山禅门。梵日太和年间入唐，参拜盐官齐安大师、药山惟俨法师。会昌四年法难肇始之时，梵日避难逃往商山静心禅修，六年返回新罗。返回后受到溟州都督金公邀请，驻留阁崛山，被封为国师。梵日的弟子行寂咸通十一年入唐，如上文所述，他步行至长安，受到唐懿宗接见。随后又游历五台山、成都静众寺、衡山等地，中和五年(885)回国，重新回到梵日门下。
顺之禅师创立的仰山禅门。顺之禅师大中十二年(858)人唐，拜访仰山慧寂和尚，景文王在位期间返回新罗。
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生物大分子的结构与功能的研究是了解分子水平的先象的基础。没有对生物大分子的结构与功能的认识，就没有分子生物学。正如没有dna双螺旋结构的发现，就没有遗传传达传递的中心法则，也就没有今天的分子生物学。结构分子以由第一分子进入对复和物乃至多亚基，多分子复和体结构研究。同时，过去难以研究的分子水平上的生命运动情况也随着研究的深入和技术手段的发展而逐渐由难点变为热点。蛋白质晶体学研究已从生物大分子静态（时间统计）的结构分析开始进入动态（时间分辨）的结构分析及动力学分析。第十三届国际生物物理大会的25个专题讨论会中有一半以上涉及蛋白质的结构与功能，而“结构与功能”又强调“动力学（dynamics）”，即动态的结构或结构的运动与蛋白质分子功能的关系，以及对大分子相互作用的贡献。
蛋白质折叠问题被列为“21世纪的生物物理学”的重要课题，它是分子生物学中心法则尚未解决的一个重大生物学问题。从一级序列预测蛋白质分子的三级结构并进一步预测其功能，是极富挑战性的工作。研究蛋白质折叠，尤其是折叠早期过程，即新生肽段的折叠过程是全面的最终阐明中心法则的一个根本问题，在这一领域中，近年来的新发现对新生肽段能够自发进行折叠的传统概念做了根本的修正。wwW.133229.COM这其中，x射线晶体衍射和各种波谱技术以及电子显微镜技术等发挥了极其重要的作用。第十三届国际生物物理大会上，nobel奖获得者ernst在报告中强调指出，nmr用于研究蛋白质的一个主要优点在于它能极为详细的研究蛋白质分子的动力学，即动态的结构或结构的运动与蛋白质分子功能的关系。目前的nmr技术已经能够在秒到皮秒的时间域上观察蛋白质结构的运动过程，其中包括主链和侧链的运动，以及在各种不同的温度和压力下蛋白质的折叠和去折叠过程。蛋白质大分子的结构分析也不仅仅只是解出某个具体的结构，而是更加关注结构的涨落和运动。例如，运输小分子的酶和蛋白质通常存在着两种构象，结合配体的和未结合配体的。一种构象内的结构涨落是构象转变所必需的前奏，因此需要把光谱学，波谱学和x 射线结构分析结合起来研究结构涨落的平衡，构象改变和改变过程中形成的多种中间态，又如，为了了解蛋白质是如何折叠的，就必须知道折叠时几个基本过程的时间尺度和机制，包括二级结构（螺旋和折叠）的形成，卷曲，长程相互作用以及未折叠肽段的全面崩溃。多种技术用于研究次过程，如快速核磁共振，快速光谱技术（荧光，远紫外和近紫外圆二色）。
一、新生肽段折叠研究中的新观点
长期以来关于蛋白质折叠，形成了自组装（self-assembly）的主导学说，因此，在研究新生肽段的折叠时，就很自然的把在体外蛋白质折叠研究中得到的规律推广到体内，用变性蛋白的复性作为新生肽段折叠的模型，并认为细胞中新合成的多肽链，不需要别的分子的帮助，不需要额外能量的补充，就应该能够自发的折叠而形成它的功能状态。
1988年，邹承鲁明确指出，新生肽段的折叠在合成早期业已开始，而不是合成完后才开始进行，随着肽段的延伸同时折叠，又不断进行构象的调整，先形成的结构会作用于后合成的肽段的折叠，而后合成的结构又会影响前面已形成的结构的调整。因此，在肽段延伸过程中形成的结构往往不一定是最终功能蛋白中的结构。这样，三维结构的形成是一个同时进行着的，协调的动态过程。九十年代一类具有新的生物功能的蛋白，分子伴侣（molecular chaperone）的发现，以及在更广泛意义上说的帮助蛋白质折叠的辅助蛋白(accessory protein) 的提出，说明细胞内新生肽段的折叠一般意义上说是需要帮助的，而不是自发进行的。
二、蛋白质分子的折叠和分子伴侣的作用
蛋白质分子的三维结构，除了共价的肽键和二硫键，还靠大量极其复杂的弱次级键共同作用。因此新生肽段在一边合成一边折叠过程中有可能暂时形成在最终成熟蛋白中不存在不该有的结构，他们常常是一些疏水表面，它们之间很可能发生本不应该有的错误的相互作用而形成的非功能的分子，甚至造成分子的聚集和沉淀。按照自组装学说，每一步折叠都是正确的，充分的，必要的。实际上折叠过程是一个正确途径和错误途径相互竞争的过程，为了提高蛋白质生物合成的效率的，应该有帮助正确途径的竞争机制，分子伴侣就是这样通过进化应运而生的。它们的功能是识别新生肽段折叠过程中暂时暴露的错误结构的，与之结合，生成复和物，从而防止这些表面之间过早的相互作用，阻止不正确的非功能的折叠途径，抑制不可逆聚合物产生，这样必然促进折叠向正确方向进行。（从哲学的观点说，似乎很容易驳斥自组装学说，它违背了矛盾的普遍性原理，试想，如果蛋白质的每一步折叠均是正确的，充分的，必要的，岂不是在无任何矛盾的前提下，完成了复杂的最稳定构象的形成，即完成了由量变到质变的伟大飞跃，从无活性的肽链变成有活性的功能蛋白，这显然是违背哲学基本原理的。换一个角度想，生物进化的过程本来就充满着不定向的变异，这些变异中有适应环境的，也有不适应环境的，“物竞天择”，自然的选择淘汰了那些不适应的，保留了那些适应的。蛋白质分子的折叠不也与此类似吗？我想，蛋白质的一级结构只是肽链折叠并形成功能蛋白的特定三维结构的内因，实际上，多肽链在形成活性蛋白的每一步，都有潜在的可能形成“不正确”的折叠，如果没有象分子伴侣或其它帮助蛋白等外部因素的作用，多肽链也永远不能折叠成为活性蛋百。）
三，分子伴侣的作用机制
分子伴侣的作用机制实际上就是它如何与靶蛋白识别，结合，又解离的机制。有的分子伴侣 具高度专一性，如一些分子内分子伴侣，还有细菌pseudomonas cepacia的酯酶，有它自己的“私有分子伴侣”。它是由基因lima编码的，与酯酶的基因lipa只隔3个碱基，可能是进化过程中发生的基因分裂造成的。而一般的分子伴侣识别特异性不高，它是怎样识别需要它帮助的对象的呢？现在只能说分子伴侣识别非天然构象，而不去理会天然的构象。由于在天然分子中，疏水残基多半位于分子的内部而形成疏水核，去折叠后就可能暴露出来，或者在新生肽段的折叠过程中，会暂时形成在天然构象中本应该存在于分子内部的疏水表面，因此认为分子伴侣最有可能是与疏水表面相结合，如硫氰酸酶（rhodanese）分子α-helix的疏水侧面。但是只有β-sheet结构的蛋白质才可为分子伴侣识别。
最近关于识别机制有较大的进展。bip是内质网管腔内的分子伴侣，用一种affinity panning的方法检查bip与有随机序列的十二肽结合的特异性，结果发现，hy-(w/x)-hy-x-hy-x-hy motif与bip j结合最强，hy最多的是trp、leu、phe，即较大的疏水残基。一般来说，2-4个疏水残基就足够进行结合。还有一种较普遍的说法是分子伴侣识别所谓熔球体结构（moltenglobule）。另一方面，分子伴侣本身与肽结合部位的结构分析最近也有些进展。譬如，papd的晶体结构表明，多肽结合在它的 β-sheet区。groel中，约40kd的153-531结构域是核苷酸的结合区。
分子伴侣作用的第二步是与靶蛋白形成复合物。非常盛行的一种模型认为分子伴侣常常以多聚`体形式而形成中心空洞的结构，用电子显微镜已经观察到由二圈层圆面包圈形组成的十四体groel分子和一个一层圆面包圈的七体groes分子协同作用形成中空的非对称笼状结构（cage model），推测靶蛋白可以在与周围环境隔离的中间空腔内不受干扰的进一步折叠。但是不久前一个日本实验室发现groel的一个亚基，甚至其n端去除78个氨基酸残基的50kd片段，已经不能再组装成十四体结构，都有确定的分子伴侣功能。由此，我想:也许环状分子伴侣并非每个部位都是有效的结合部位，也就是说，该二层圆面包圈组成的十四体groel分子只有一个或若干个部位能够与疏水残基或所谓的熔球体结构结合，而其余部位起识别作用，就像一个探测器一样，整个十四体groel分子以圈层或笼状结构”包裹”在多肽链的主链上，以旋进方式再多肽链的链体上运动，一旦环状多聚体的某一识别部位发现疏水结构或所谓的熔球体结构等新生肽链折叠过程中暂时暴露的错误结构，经信号转导，多聚体的结合部位便与之结合，生成复合物，抑制不正确的折叠。以上完全是我个人的猜想，是基于上述两个试验现象的矛盾而试图作一番解释。至于为什么假设以旋进方式在多肽链上运动，我并没有相应的根据，只是觉得这应该是一个动态过程，因此作了一番狂妄的假想,另外，我觉得也许可以用x射线衍射来探测一下分子伴侣groel和groes组成的笼状结构，看看它的a×b×c是否足以容纳多肽链的某一段，或者它的内部和外部的疏水性质和其他一些物化性质如何，也许可以找到支持或驳斥上述假设的证据。
以上谈的都是蛋白质的分子伴侣。不久前又出现了一个新名词“dna chaperones”，dna分子伴侣，这种分子伴侣是与dna相结合并帮助dna折叠的。在这种复合物中，dna分子包围在蛋白质分子的表面，既是高度有序的，又是在一定程度上结构已有所改变的。dna与蛋白的这种相互作用对dna的转录，复制以及重组都十分重要;或如在核小体中，对dna的包装是必须的。dna在溶液中的结构有相当的刚性，必须克服一个能障才能转变成它的蛋白复合物中的结构，分子伴侣的作用就是帮助dna分子进行折叠和扭曲，从而把dna稳定在一个适合于和蛋白结构的特定构型中。这种结合是协同的，可逆的在形成复合物之后便解离下来。因此，不论是dna分子伴侣还是蛋白分子伴侣，都与dna和蛋白的相互作用有关，与基因调控有关，看来，分子伴侣确实与最终阐明中心法则当前主要问题有密切关系。
四、分子伴侣和酶的区别
与分子伴侣不同，以确定为帮助蛋白质折叠的酶目前只有两个，一个是蛋白质二硫键异构酶(protein disulfide isomerase，pdi); 另一个是肽基脯氨酸顺反异构酶(peptidyl prolyl cis-trans isomerase，ppi)。以pdi为例，众所周知，蛋白质分子中的二硫键与新生肽段的折叠密切相关，对维系蛋白质分子的结构稳定性和功能发挥也有重要作用。pdi定位在内质网管腔内，含量丰富，催化蛋白质分子内巯基与二硫键之间的交换反应。同时，它是目前发现的最为突出的多功能蛋白，除了二硫键的异构酶的基本功能外，它还是脯氨酸-4-羟化酶的α亚基;又是微粒体内甘油三酯转移蛋白复合物的小亚基，还是一种糖基化位点结合蛋白(gkycisylation site binding protein)等。其中，最引人注目的还是它有与多肽结合的能力，可以结合具有不同序列，长度和电荷分布的肽，特异性较低，主要是与肽的主链相作用，但对巯基尚有一些偏爱。按照分子伴侣的定义，一般认为pdi和分子伴侣是两类不同的帮助蛋白，但是我国上海生物物理研究所最近提出不同的看法，认为蛋白质二硫键异构酶也具有分子伴侣的功能。
蛋白质分子中天然二硫键的形成要求这些在肽链上往往处于不相邻位置的巯基，首先通过肽链一定程度的折叠，才能相互接近到可以正确形成二硫键的位置。肽链的自身折叠是一个慢过程，而蛋白质二硫键异构酶催化蛋白质天然二硫键的形成却是一个快过程。另一方面，蛋白质二硫键异构酶具有低特异性的与各种不同肽链相结合的能力，在内质网中以极高的浓度存在，又是是一个钙结合蛋白，是一个能被磷酸化的蛋白，这些都已经符合了分子伴侣的条件。因此他们推测蛋白质二硫键异构酶很可能首先通过它与伸展的，或部分折叠的肽段的结合，阻止错误的折叠途径，促进正确的中间物生成，帮助肽链折叠是相应的巯基配对，从而是正确的二硫键得以形成;然后催化巯基的氧化或二硫键的异构而形成天然二硫键。他们认为蛋白质二硫键异构酶的酶活性与它的分子伴侣功能不是相互排斥，而是密切相关，协调统一的。分子伴侣与帮助新生肽链折叠的酶之间，大概不应该，也不能够划一条绝对的分界线。我想:酶的最主要特性就是催化生化反应，分子伴侣的主要作用是与新生肽段的错误构象结合，从而阻止肽链不正确的非功能的折叠途径，促使其向正确的折叠方向反应，这难道不可以理解成间接的催化肽链的折叠吗?从表观上看，抑制不正确的折叠途径等于加快了正确反应的速度。所以，我本人也很赞成他们的观点。最近的试验已经为这一假说提供了很好的证据。pdi明显抑制变性的甘油醛-3-磷酸脱氢酶在复性股过程中的严重聚合，有效的提高它的复性效率，与典型的分子伴侣groe系统对甘油醛3-磷酸脱氢酶复性的效应极其相似。
五、分子伴侣的结构
目前唯一解出晶体结构的分子伴侣是e.coli的papd，帮助鞭毛蛋白折叠的分子伴侣。还有hsp70的n端结构域，即atp结合域也以有晶体结构。用电子显微镜已经清楚的看到了groel的十四聚体和groel的七聚体的四级结构， 象两个圆形中空的面包圈叠在一起，用nmr以及各种溶液构象变化是研究分子伴侣作用机制的有效手段。
六、分子伴侣研究的实际应用
分子伴侣的研究成果必然会大大加深我们对生命现象的认识，同时也一定会增加我们与自然斗争的能力和自身生存的能力。由于分子伴侣在生命活动的各个层次都具有重要作用，它的突变和损伤也必定会引起疾病，因此可以期望运用分子伴侣的知识来治疗所谓的”分子伴侣病”。另一方面，利用对分子伴侣的研究成果从根本上提高基因工程和蛋白工程的成功率，也必将对大幅度提高人类生活水平起重要作用。
[ 参 考 书 目]
1. 李宝健 主编，面向21世纪生命科学发展前沿， 广东科技出版社，1996年11月第一版：93-104页
[关键字]生物大分子分子伴侣蛋白质的折叠识别结合
生物大分子的结构与功能的研究是了解分子水平的先象的基础。没有对生物大分子的结构与功能的认识，就没有分子生物学。正如没有DNA双螺旋结构的发现，就没有遗传传达传递的中心法则，也就没有今天的分子生物学。结构分子以由第一分子进入对复和物乃至多亚基，多分子复和体结构研究。同时，过去难以研究的分子水平上的生命运动情况也随着研究的深入和技术手段的发展而逐渐由难点变为热点。蛋白质晶体学研究已从生物大分子静态（时间统计）的结构分析开始进入动态（时间分辨）的结构分析及动力学分析。第十三届国际生物物理大会的25个专题讨论会中有一半以上涉及蛋白质的结构与功能，而“结构与功能”又强调“动力学（Dynamics）”，即动态的结构或结构的运动与蛋白质分子功能的关系，以及对大分子相互作用的贡献。
蛋白质折叠问题被列为“21世纪的生物物理学”的重要课题，它是分子生物学中心法则尚未解决的一个重大生物学问题。从一级序列预测蛋白质分子的三级结构并进一步预测其功能，是极富挑战性的工作。研究蛋白质折叠，尤其是折叠早期过程，即新生肽段的折叠过程是全面的最终阐明中心法则的一个根本问题，在这一领域中，近年来的新发现对新生肽段能够自发进行折叠的传统概念做了根本的修正。这其中，X射线晶体衍射和各种波谱技术以及电子显微镜技术等发挥了极其重要的作用。第十三届国际生物物理大会上，Nobel奖获得者Ernst在报告中强调指出，NMR用于研究蛋白质的一个主要优点在于它能极为详细的研究蛋白质分子的动力学，即动态的结构或结构的运动与蛋白质分子功能的关系。目前的NMR技术已经能够在秒到皮秒的时间域上观察蛋白质结构的运动过程，其中包括主链和侧链的运动，以及在各种不同的温度和压力下蛋白质的折叠和去折叠过程。蛋白质大分子的结构分析也不仅仅只是解出某个具体的结构，而是更加关注结构的涨落和运动。例如，运输小分子的酶和蛋白质通常存在着两种构象，结合配体的和未结合配体的。一种构象内的结构涨落是构象转变所必需的前奏，因此需要把光谱学，波谱学和X射线结构分析结合起来研究结构涨落的平衡，构象改变和改变过程中形成的多种中间态，又如，为了了解蛋白质是如何折叠的，就必须知道折叠时几个基本过程的时间尺度和机制，包括二级结构（螺旋和折叠）的形成，卷曲，长程相互作用以及未折叠肽段的全面崩溃。多种技术用于研究次过程，如快速核磁共振，快速光谱技术（荧光，远紫外和近紫外圆二色）。
一、新生肽段折叠研究中的新观点
长期以来关于蛋白质折叠，形成了自组装（self-assembly）的主导学说，因此，在研究新生肽段的折叠时，就很自然的把在体外蛋白质折叠研究中得到的规律推广到体内，用变性蛋白的复性作为新生肽段折叠的模型，并认为细胞中新合成的多肽链，不需要别的分子的帮助，不需要额外能量的补充，就应该能够自发的折叠而形成它的功能状态。
1988年，邹承鲁明确指出，新生肽段的折叠在合成早期业已开始，而不是合成完后才开始进行，随着肽段的延伸同时折叠，又不断进行构象的调整，先形成的结构会作用于后合成的肽段的折叠，而后合成的结构又会影响前面已形成的结构的调整。因此，在肽段延伸过程中形成的结构往往不一定是最终功能蛋白中的结构。这样，三维结构的形成是一个同时进行着的，协调的动态过程。九十年代一类具有新的生物功能的蛋白，分子伴侣（Molecularchaperone）的发现，以及在更广泛意义上说的帮助蛋白质折叠的辅助蛋白(Accessoryprotein)的提出，说明细胞内新生肽段的折叠一般意义上说是需要帮助的，而不是自发进行的。
二、蛋白质分子的折叠和分子伴侣的作用
蛋白质分子的三维结构，除了共价的肽键和二硫键，还靠大量极其复杂的弱次级键共同作用。因此新生肽段在一边合成一边折叠过程中有可能暂时形成在最终成熟蛋白中不存在不该有的结构，他们常常是一些疏水表面，它们之间很可能发生本不应该有的错误的相互作用而形成的非功能的分子，甚至造成分子的聚集和沉淀。按照自组装学说，每一步折叠都是正确的，充分的，必要的。实际上折叠过程是一个正确途径和错误途径相互竞争的过程，为了提高蛋白质生物合成的效率的，应该有帮助正确途径的竞争机制，分子伴侣就是这样通过进化应运而生的。它们的功能是识别新生肽段折叠过程中暂时暴露的错误结构的，与之结合，生成复和物，从而防止这些表面之间过早的相互作用，阻止不正确的非功能的折叠途径，抑制不可逆聚合物产生，这样必然促进折叠向正确方向进行。（从哲学的观点说，似乎很容易驳斥自组装学说，它违背了矛盾的普遍性原理，试想，如果蛋白质的每一步折叠均是正确的，充分的，必要的，岂不是在无任何矛盾的前提下，完成了复杂的最稳定构象的形成，即完成了由量变到质变的伟大飞跃，从无活性的肽链变成有活性的功能蛋白，这显然是违背哲学基本原理的。换一个角度想，生物进化的过程本来就充满着不定向的变异，这些变异中有适应环境的，也有不适应环境的，“物竞天择”，自然的选择淘汰了那些不适应的，保留了那些适应的。蛋白质分子的折叠不也与此类似吗？我想，蛋白质的一级结构只是肽链折叠并形成功能蛋白的特定三维结构的内因，实际上，多肽链在形成活性蛋白的每一步，都有潜在的可能形成“不正确”的折叠，如果没有象分子伴侣或其它帮助蛋白等外部因素的作用，多肽链也永远不能折叠成为活性蛋百。）
三，分子伴侣的作用机制
分子伴侣的作用机制实际上就是它如何与靶蛋白识别，结合，又解离的机制。有的分子伴侣具高度专一性，如一些分子内分子伴侣，还有细菌Pseudomonascepacia的酯酶，有它自己的“私有分子伴侣”。它是由基因limA编码的，与酯酶的基因LipA只隔3个碱基，可能是进化过程中发生的基因分裂造成的。而一般的分子伴侣识别特异性不高，它是怎样识别需要它帮助的对象的呢？现在只能说分子伴侣识别非天然构象，而不去理会天然的构象。由于在天然分子中，疏水残基多半位于分子的内部而形成疏水核，去折叠后就可能暴露出来，或者在新生肽段的折叠过程中，会暂时形成在天然构象中本应该存在于分子内部的疏水表面，因此认为分子伴侣最有可能是与疏水表面相结合，如硫氰酸酶（Rhodanese）分子α-helix的疏水侧面。但是只有β-sheet结构的蛋白质才可为分子伴侣识别。
最近关于识别机制有较大的进展。Bip是内质网管腔内的分子伴侣，用一种affinitypanning的方法检查Bip与有随机序列的十二肽结合的特异性，结果发现，Hy-(W/X)-Hy-X-Hy-X-Hymotif与Bipj结合最强，Hy最多的是Trp、Leu、Phe，即较大的疏水残基。一般来说，2-4个疏水残基就足够进行结合。还有一种较普遍的说法是分子伴侣识别所谓熔球体结构（moltenglobule）。另一方面，分子伴侣本身与肽结合部位的结构分析最近也有些进展。譬如，PapD的晶体结构表明，多肽结合在它的β-sheet区。GroEL中，约40kD的153-531结构域是核苷酸的结合区。
分子伴侣作用的第二步是与靶蛋白形成复合物。非常盛行的一种模型认为分子伴侣常常以多聚`体形式而形成中心空洞的结构，用电子显微镜已经观察到由二圈层圆面包圈形组成的十四体GroEL分子和一个一层圆面包圈的七体GroES分子协同作用形成中空的非对称笼状结构（cagemodel），推测靶蛋白可以在与周围环境隔离的中间空腔内不受干扰的进一步折叠。但是不久前一个日本实验室发现GroEL的一个亚基，甚至其N端去除78个氨基酸残基的50kD片段，已经不能再组装成十四体结构，都有确定的分子伴侣功能。由此，我想:也许环状分子伴侣并非每个部位都是有效的结合部位，也就是说，该二层圆面包圈组成的十四体GroEL分子只有一个或若干个部位能够与疏水残基或所谓的熔球体结构结合，而其余部位起识别作用，就像一个探测器一样，整个十四体GroEL分子以圈层或笼状结构”包裹”在多肽链的主链上，以旋进方式再多肽链的链体上运动，一旦环状多聚体的某一识别部位发现疏水结构或所谓的熔球体结构等新生肽链折叠过程中暂时暴露的错误结构，经信号转导，多聚体的结合部位便与之结合，生成复合物，抑制不正确的折叠。以上完全是我个人的猜想，是基于上述两个试验现象的矛盾而试图作一番解释。至于为什么假设以旋进方式在多肽链上运动，我并没有相应的根据，只是觉得这应该是一个动态过程，因此作了一番狂妄的假想,另外，我觉得也许可以用X射线衍射来探测一下分子伴侣GroEL和GroES组成的笼状结构，看看它的a×b×c是否足以容纳多肽链的某一段，或者它的内部和外部的疏水性质和其他一些物化性质如何，也许可以找到支持或驳斥上述假设的证据。
以上谈的都是蛋白质的分子伴侣。不久前又出现了一个新名词“DNAchaperones”，DNA分子伴侣，这种分子伴侣是与DNA相结合并帮助DNA折叠的。在这种复合物中，DNA分子包围在蛋白质分子的表面，既是高度有序的，又是在一定程度上结构已有所改变的。DNA与蛋白的这种相互作用对DNA的转录，复制以及重组都十分重要;或如在核小体中，对DNA的包装是必须的。DNA在溶液中的结构有相当的刚性，必须克服一个能障才能转变成它的蛋白复合物中的结构，分子伴侣的作用就是帮助DNA分子进行折叠和扭曲，从而把DNA稳定在一个适合于和蛋白结构的特定构型中。这种结合是协同的，可逆的在形成复合物之后便解离下来。因此，不论是DNA分子伴侣还是蛋白分子伴侣，都与DNA和蛋白的相互作用有关，与基因调控有关，看来，分子伴侣确实与最终阐明中心法则当前主要问题有密切关系。
四、分子伴侣和酶的区别
与分子伴侣不同，以确定为帮助蛋白质折叠的酶目前只有两个，一个是蛋白质二硫键异构酶(proteindisulfideisomerase，PDI);另一个是肽基脯氨酸顺反异构酶(peptidylprolylcis-transisomerase，PPI)。以PDI为例，众所周知，蛋白质分子中的二硫键与新生肽段的折叠密切相关，对维系蛋白质分子的结构稳定性和功能发挥也有重要作用。PDI定位在内质网管腔内，含量丰富，催化蛋白质分子内巯基与二硫键之间的交换反应。同时，它是目前发现的最为突出的多功能蛋白，除了二硫键的异构酶的基本功能外，它还是脯氨酸-4-羟化酶的α亚基;又是微粒体内甘油三酯转移蛋白复合物的小亚基，还是一种糖基化位点结合蛋白(gkycisylationsitebindingprotein)等。其中，最引人注目的还是它有与多肽结合的能力，可以结合具有不同序列，长度和电荷分布的肽，特异性较低，主要是与肽的主链相作用，但对巯基尚有一些偏爱。按照分子伴侣的定义，一般认为PDI和分子伴侣是两类不同的帮助蛋白，但是我国上海生物物理研究所最近提出不同的看法，认为蛋白质二硫键异构酶也具有分子伴侣的功能。
蛋白质分子中天然二硫键的形成要求这些在肽链上往往处于不相邻位置的巯基，首先通过肽链一定程度的折叠，才能相互接近到可以正确形成二硫键的位置。肽链的自身折叠是一个慢过程，而蛋白质二硫键异构酶催化蛋白质天然二硫键的形成却是一个快过程。另一方面，蛋白质二硫键异构酶具有低特异性的与各种不同肽链相结合的能力，在内质网中以极高的浓度存在，又是是一个钙结合蛋白，是一个能被磷酸化的蛋白，这些都已经符合了分子伴侣的条件。因此他们推测蛋白质二硫键异构酶很可能首先通过它与伸展的，或部分折叠的肽段的结合，阻止错误的折叠途径，促进正确的中间物生成，帮助肽链折叠是相应的巯基配对，从而是正确的二硫键得以形成;然后催化巯基的氧化或二硫键的异构而形成天然二硫键。他们认为蛋白质二硫键异构酶的酶活性与它的分子伴侣功能不是相互排斥，而是密切相关，协调统一的。分子伴侣与帮助新生肽链折叠的酶之间，大概不应该，也不能够划一条绝对的分界线。我想:酶的最主要特性就是催化生化反应，分子伴侣的主要作用是与新生肽段的错误构象结合，从而阻止肽链不正确的非功能的折叠途径，促使其向正确的折叠方向反应，这难道不可以理解成间接的催化肽链的折叠吗?从表观上看，抑制不正确的折叠途径等于加快了正确反应的速度。所以，我本人也很赞成他们的观点。最近的试验已经为这一假说提供了很好的证据。PDI明显抑制变性的甘油醛-3-磷酸脱氢酶在复性股过程中的严重聚合，有效的提高它的复性效率，与典型的分子伴侣GroE系统对甘油醛3-磷酸脱氢酶复性的效应极其相似。
五、分子伴侣的结构
目前唯一解出晶体结构的分子伴侣是E.coli的PapD，帮助鞭毛蛋白折叠的分子伴侣。还有HSP70的N端结构域，即ATP结合域也以有晶体结构。用电子显微镜已经清楚的看到了GroEL的十四聚体和GroEL的七聚体的四级结构，象两个圆形中空的面包圈叠在一起，用NMR以及各种溶液构象变化是研究分子伴侣作用机制的有效手段。
六、分子伴侣研究的实际应用
分子伴侣的研究成果必然会大大加深我们对生命现象的认识，同时也一定会增加我们与自然斗争的能力和自身生存的能力。由于分子伴侣在生命活动的各个层次都具有重要作用，它的突变和损伤也必定会引起疾病，因此可以期望运用分子伴侣的知识来治疗所谓的”分子伴侣病”。另一方面，利用对分子伴侣的研究成果从根本上提高基因工程和蛋白工程的成功率，也必将对大幅度提高人类生活水平起重要作用。
[参考书目]
1.李宝健主编，面向21世纪生命科学发展前沿，广东科技出版社，1996年11月第一版：93-104页
[关键词] 胰腺癌；热休克蛋白90α；免疫组织化学法；胰腺炎；临床病理特征
[中图分类号] R735.9 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2013）05（c）-0066-03
热休克蛋白（heat shock protein，HSP）是一类进化上高度保守的细胞应激蛋白家族[1]，热休克蛋白90α（heat shock protein 90α，HSP90α）是HSP的亚型之一，研究证实，其被发现在多种恶性肿瘤中出现异常表达，与肿瘤的发生、发展关系密切[2]，研究发现，许多肿瘤细胞中如肾癌、胃癌、肝癌等组织中HSP90α表达均明显高于癌旁组织[3-4]。因此，探讨HSP90α在肿瘤中的发生机制成为当前研究的热点。本研究应用免疫组化方法检测胰腺癌、胰腺炎及癌旁组织中HSP90α的阳性表达情况，旨在探讨HSP90α在胰腺癌发生、发展中的作用机制，从而为胰腺癌的治疗及研究提供一定的理论依据。
1 资料与方法
1.1 一般资料
选择2007年12月～2012年12月在河南大学淮河医院普外科所获得的胰腺癌组织标本40例，所有患者术前均经病理学检查确诊，均签署知情同意书。40例胰腺癌患者中，男22例，女18例；年龄49～76岁，平均（58.4±7.2）岁。组织分化程度：高分化15例，中低分化25例；根据UICC标准TNM分期：Ⅰ期7例，Ⅱ期10例，Ⅲ期14例，Ⅳ期9例。淋巴结转移情况：有淋巴结转移26例，无淋巴结转移14例。另选择癌旁正常组织30例为对照组，其中男16例，女14例，年龄46～78岁；以及取同期胰腺炎组织32例，其中男18例，女14例，年龄48～75岁；各组基线资料比较差异无统计学意义（P > 0.05），具有可比性。
1.2 免疫组化方法
1.2.1 试剂 采用Elivsion免疫组织化学法检测HSP90α蛋白的表达，Elivsion试剂盒、DAB显色试剂盒以及兔抗人HSP9α单克隆抗体均购自北京中山生物技术有限公司。操作程序按说明书进行。阴性对照以PBS替代一抗，用已知阳性标本作阳性对照。
1.2.2 具体操作步骤 石蜡切片脱蜡，酒精梯度水化。将切片浸于沸腾的柠檬酸缓冲液中，温度保持在98℃以上，持续10～20 min；置室温冷却20 min。用3%H2O2处理5 min；PBS冲洗3次，每次3 min。滴加所需抗体，4℃冰箱内过夜。PBS冲洗3次，每次3 min；甩干PBS液，加羊抗小鼠抗体同辣根过氧化物酶（HRP）复合物（B液），室温放置30 min，DAB显色，苏木精复染、梯度酒精脱水、二甲苯透明、中性树胶封片。
1.3 结果判断
HSP90α免疫阳性物质定位于细胞质，凡细胞质出现明显的棕黄色颗粒者为阳性细胞。在每个标本随机选取400倍视野观察、计算阳性细胞数，参照Kapitanovic标准[5]，采用双评分半定量积分法进行评分：每个视野的染色得分为靶细胞阳性表达率与表达强度得分的乘积。0分为（-）；1～4分为（+）；5～8分为（++）；>9分为（+++），取该标本5个视野的染色得分均值。
1.4 统计学方法
全部数据的处理均采用SPSS 12.0统计学软件进行分析，率的比较采用χ2检验或精确概率法，以P < 0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 胰腺癌、胰腺炎和癌旁组织中HSP90α蛋白的阳性表达
胰腺癌、胰腺炎和癌旁组织中HSP90α蛋白的阳性表达率分别为70.0%、28.0%、16.7%，胰腺癌组织中HSP90α蛋白的阳性表达率明显高于胰腺炎组织及癌旁组织（P < 0.01），虽然胰腺炎组织中HSP90α蛋白的阳性表达率高于癌旁组织，但差异无统计学意义（P > 0.05）。见表1。
2.2 胰腺癌组织中HSP90α蛋白表达的临床病理特征分析
胰腺癌组织中HSP90α蛋白表达与胰腺癌患者的TNM分期、分化程度、淋巴结转移以及是否远处转移有关，差异有统计学意义（P < 0.05），而与胰腺癌患者的年龄、性别、肿瘤大小、肿瘤部位、CA199无关（P > 0.05）。见表2。
3 讨论
生物细胞在受热或其他理化因素作用下，可以合成高度保守的热休克蛋白，通常又称为应激蛋白（stress protein），根据其同源程度及分子量大小可分为Hsp110、Hsp90、Hsp70、Hsp60、小分子Hsp（22～23 ku）及泛素等。Hsp在细胞代谢、信息传递、生长分化等过程中具有重要的调控作用，还参与肿瘤的发生发展，并与其生物学行为关系密切。
热休克蛋白（heat shock protein，HSP）通常与具有不同功能的多种蛋白质在细胞中形成复合体调节靶蛋白的活性和功能，但又不参与靶蛋白的组成，因此热休克蛋白又被认为是一种“分子伴侣”或伴侣蛋白[6]。
热休克蛋白90（HSP90）是一组高度保守的分子伴侣，不仅参与蛋白的运输、解聚以及保护细脆免受环境压力，而且在机体的抗感染免疫、自身免疫、肿瘤免疫中发挥着重要作用[7]。Hsp90又分为Hsp90α和Hsp90p，HSP90α是HSP90的亚型之一，作为HSP大家族中的主要成员，又是主要的分子伴侣蛋白质，在体内外具有许多生物学功能，尤其免疫功能和抗凋亡功能与肿瘤的形成密切相关。HSP90通过其受体蛋白多途径多环节影响肿瘤的发生、发展进程。许多研究均发现，许多肿瘤细胞中如肾癌、胃癌、肝癌等组织中HSP90α表达均明显高于癌旁组织。Pick等[8]研究发现，HSP90 mRNA在乳腺癌组织的表达明显高于非癌组织，提示HSP90α的表达与人类乳腺癌的细胞增殖有关。且研究进一步证实，恶性程度高的乳腺组织HSP90α表达更高；也有研究发现，HSP90α mRNA表达在卵巢癌、胰腺癌中表达越多，病情越重[9]。刘明强等[10]报道，肿瘤细胞中HSP90α的表达比正常细胞高2～10倍，且在病毒转化和化学诱导的肿瘤细胞中可明显看到HSP90α水平上升趋势。在胰腺癌中，HSP90α呈选择性高表达，细胞中存在大量的HSP90α mRNA。且有研究证实，肿瘤的侵袭性越强，恶性度越高，HSP90α表达越多，这也说明Hsp对肿瘤细胞具有保护作用[11]。杨士勇等[12]应用免疫组化方法证实HSP90α在胰腺癌组织中出现高表达，且HSP90α的的表达与患者病理分化程度、淋巴结转移、TNM分期密切相关（P < 0.05），说明HSP90α与胰腺癌的侵袭、转移能力密切相关，可作为胰腺癌预后判断的指标之一，HSP90α的高表达提示患者预后差，本组研究也证实了上述观点。本组研究结果显示，胰腺癌组织中HSP90α蛋白的阳性表达率达70.0%，明显高于癌旁正常组织（P < 0.01）。且HSP90α蛋白的阳性表达与患者的TNM分期、分化程度、淋巴结转移以及是否远处转移有关（P < 0.05）。而与胰腺癌患者的年龄、性别、肿瘤大小、肿瘤部位、CA199无关（P > 0.05）。
综上所述，笔者认为HSP90α参与了胰腺癌的发生、发展过程，在肿瘤细胞的分化和增殖、生存和移动、血管形成和转移中起作用，其表达与胰腺癌的浸润、转移等恶性生物学行为密切相关，可作为判断胰腺癌预后的指标之一。随着近年来对肿瘤在分子水平上认识的不断深入，HSP90α逐渐成为治疗肿瘤的新靶点，其具体机制仍有待进一步深入的研究。
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