检验医学与临床杂志统计源期刊

摘要：目的对人乳头瘤病毒(HPV)16E7基因中与宿主Rb蛋白结合区域进行突变获得HPV16E7突变体(HPV16mE7)序列,原核表达获得HPV16mE7蛋白。方法采用分子克隆技术扩增野生型HPV16E7基因,设计特异性引物对目的基因进行定点突变并构建表达质粒,转化进入原核表达体系并通过IPTG诱导表达,表达产物大小及纯度经十二烷基硫钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定,免疫原性经蛋白免疫印迹法(Westernblot)鉴定。结果准确按照设计突变目的基因特定位点,SDS-PAGE显示获得高纯度目的蛋白,Westernblot结果显示目的蛋白具有良好的免疫原性。结论成功对HPV16E7进行定点突变并获得纯度较高免疫原性良好的突变表达蛋白。

摘要：目的作为突变检测的经典方法,第1代测序法(Sanger测序法)可以清晰地读取基因中碱基置换、颠换、缺失和插入等改变,临床已知位点突变引物的设计涉及数据库查询、转录本及位点的核查等环节,过程繁琐。本研究尝试提出一套实用、易操作的已知位点突变引物设计流程。方法随机抽取2018年7月在该院病理科分子病理实验室进行BRAF(V600E)基因检测和FOXL2(C134W)基因检测的甲状腺乳头状癌患者和颗粒细胞瘤患者检测结果各1例。对于LRG网站中已录入基因组、氨基酸、蛋白质3种序列的基因,进入LRG网站下载3种序列,使用Lasergene(DNASTAR,USA)软件通过3种序列的人工比对,确定基因版本号无误,根据突变位点前后400个序列,设计引物;针对LRG网页还未收入3种序列的基因,先人工通过NCBI各个基因库搜索相应的基因组、氨基酸、蛋白质3种序列,并核实3种序列的版本匹配,再根据上述流程设计引物。结果引物设计完成后,经上海生物工程公司订购,使用已知突变结果的FFPE样本作检测,用ABI3500Dx(ThermoFisher,Scientific,America)测序,观察测序结果,确认所验证基因突变点包含在该序列内。结论目前临床治疗及报告习惯使用氨基酸位置提示突变,而引物设计需要通过核酸位点,因此确认3种序列基因版本号很重要;对于部分已收入LRG网站的基因,一些版本号也会与临床报告中的突变位点有出入,所以即使是有LRG号的基因也要核查基因组、氨基酸、蛋白质3种序列。

摘要：目的分析近3年成都中医药大学附属医院从临床分离的革兰阴性杆菌的耐药性及分布特征,指导临床合理使用抗菌药物。方法收集2014-2016年分离自该院临床的6749株非重复革兰阴性杆菌,采用Vitek-2compact仪进行鉴定和药敏试验,采用Whonet5.6软件进行数据分析。结果近3年分离的革兰阴性杆菌,以大肠埃希菌、鲍曼不动杆菌、铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯菌、嗜麦芽窄食单胞菌为主,且铜绿假单胞菌的分离率略有上升。大肠埃希菌近3年检出的产超广谱β-内酰胺酶菌株均大于50.0%;鲍曼不动杆菌对替加环素的耐药率最低,对阿米卡星、左氧氟沙星的耐药率分别从2014年27.2%、13.0%增长至2016年47.4%、32.5%。铜绿假单胞菌对头孢吡肟和亚胺培南的耐药率上升,分别从9.4%增长至21.7%,16.0%增长至29.7%。肺炎克雷伯菌对亚胺培南的耐药趋势上升明显,近3年耐药率已由5.6%上升至19.9%。嗜麦芽窄食单胞菌对头孢哌酮/舒巴坦和复方磺胺甲噁唑敏感性降低,耐药率呈上升趋势。结论近3年临床分离的大多数革兰阴性杆菌耐药率呈上升趋势,应加强对医院感染病原菌的耐药性监测,指导临床合理使用抗菌药物。

摘要：目的优化免疫组织化学法检测三阴乳腺癌(TNBC)组织中Ki-67抗原实验条件,实现检测技术标准化。方法20例诊断为TNBC的组织标本,使用标准免疫组织化学检测Ki-67抗原。针对不理想的结果对实验条件进行调整,直至获得最佳结果。使用图像分析软件对阳性染色细胞计数分析。结果通过对脱蜡、孵一抗、分化时间控制等因素的优化,得到更为理想的免疫组织化学结果。阳性细胞数和总细胞数通过软件灰度值分析来获得。最终20例标本均为Ki-67阳性高表达。结论改良的免疫组织化学染色法对TNBC组织中Ki-67抗原检测结果较传统法更加精准、结果更为可靠。

摘要：目的以血清三酰甘油(TG)为例,探讨临床生化检验的不确定度评定方法。方法建立测量血清TG水平的参考测量程序,使用“bottom-up”的方法对各不确定度分量的来源进行分析,并对各不确定度分量分别进行评定。通过合成标准不确定度,进一步计算获得血清TG水平的测量扩展不确定度。结果实验室测量得到朗道常规生化质控水平2TG的平均水平为1.10mmol/L,合成标准测量不确定度结果为0.04mmol/L,在95%CI其水平的测量不确定度为(1.10±0.09)mmol/L,k=2;实验室测量得到朗道常规生化质控水平3TG的平均水平为2.96mmol/L,合成标准测量不确定度结果为0.04mmol/L,在95%CI其水平的测量不确定度结果为(2.96±0.20)mmol/L,k=2。结论建立了血清TG的测量不确定度评定方法,为临床生化检验不确定度的评定提供了有效的参考依据;对于促进临床实验室管理标准化,提高临床生化检验质量有指导意义。